Pembangunan kaedah ELISA tidak langsung untuk pengesanan antibodi IgG coronavirus sindrom cirit-birit akut babi berdasarkan protein spike rekombinan

Porcine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus (SADS-CoV) ialah coronavirus patogenik enterik babi yang baru ditemui yang boleh menyebabkan cirit-birit berair pada anak babi yang baru lahir dan menyebabkan kerugian ekonomi yang ketara kepada industri babi.Pada masa ini, tiada kaedah serologi yang sesuai untuk menilai keberkesanan jangkitan dan vaksin SADS-CoV, jadi terdapat keperluan mendesak untuk menggunakan ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) yang berkesan untuk mengimbangi kekurangan ini.Di sini, plasmid rekombinan yang menyatakan protein spike (S) SADS-CoV yang digabungkan dengan domain IgG Fc manusia telah dibina untuk menghasilkan baculovirus rekombinan dan dinyatakan dalam sel HEK 293F.Protein S-Fc ditulenkan dengan resin protein G dan mengekalkan kereaktifan dengan antibodi Fc anti-manusia dan anti-SADS-CoV.Kemudian protein S-Fc digunakan untuk membangunkan ELISA tidak langsung (S-iELISA) dan mengoptimumkan keadaan tindak balas S-iELISA.Akibatnya, dengan menganalisis nilai OD450nm bagi 40 sera negatif SADS-CoV yang disahkan oleh ujian imunofluoresensi (IFA) dan pembongkaran Barat, nilai potong ditentukan sebagai 0.3711.Pekali variasi (CV) bagi 6 sera positif SADS-CoV dalam dan antara larian S-iELISA semuanya kurang daripada 10%.Ujian kereaktifan silang menunjukkan bahawa S-iELISA tidak mempunyai kereaktifan silang dengan sera virus babi lain.Di samping itu, berdasarkan pengesanan 111 sampel serum klinikal, kadar kebetulan keseluruhan IFA dan S-iELISA ialah 97.3%.Ujian peneutralan virus dengan 7 nilai OD450nm berbeza serum menunjukkan bahawa nilai OD450nm yang dikesan oleh S-iELISA berkorelasi positif dengan ujian peneutralan virus.Akhirnya, S-iELISA dilakukan pada 300 sampel serum ladang babi.Kit komersil enterovirus babi lain menunjukkan bahawa kadar IgG positif SADS-CoV, TGEV, PDCoV dan PEDV masing-masing adalah 81.7%, 54% dan 65.3%., 6%, masing-masing.Keputusan menunjukkan bahawa S-iELISA adalah khusus, sensitif dan boleh dihasilkan semula, dan boleh digunakan untuk mengesan jangkitan SADS-CoV dalam industri babi.Artikel ini dilindungi oleh hak cipta.hak cipta terpelihara.


Masa siaran: Jun-22-2021